Untuk menjaga agar pH isolate culture fluid (cairan kultur isolat) tidak berubah atau mengalami pergeseran ekstrem akibat efek konsentrasi zat terlarut saat membeku (freeze-concentration effect) di deep freezer, Anda harus menambahkan larutan penyangga (buffer solution) ke dalam cairan kultur tersebut.
Selain larutan penyangga, Anda juga wajib menambahkan krioprotektan (cryoprotectant) untuk melindungi viabilitas sel dari kristal es.
Berikut adalah zat-zat penting yang perlu ditambahkan beserta kombinasinya:
1. Larutan Penyangga (Buffer) Utama
Pemilihan jenis buffer sangat krusial karena beberapa buffer konvensional justru mengalami perubahan pH drastis saat dibekukan (misalnya, sodium phosphate buffer bisa turun pH-nya hingga 2 unit saat membeku). Buffer yang direkomendasikan meliputi:
- Buffer Good (seperti HEPES atau MOPS): Sangat stabil dan memiliki resistensi yang sangat baik terhadap perubahan suhu dan pembekuan.
- Potassium Phosphate Buffer: Jauh lebih stabil saat membeku dibandingkan sodium phosphate, karena tidak mudah mengendap pada suhu rendah.
2. Krioprotektan (Cryoprotectant) yang Kompatibel
Krioprotektan berfungsi mencegah air membentuk kristal es tajam yang dapat merusak membran sel isolat:
- Gliserol (Glycerol): Digunakan dengan konsentrasi akhir 15% hingga 30% v/v. Ini adalah standar emas untuk penyimpanan bakteri dan jamur di deep freezer (-20°C hingga -80°C).
- DMSO (Dimethyl Sulfoxide): Digunakan dengan konsentrasi akhir 5% hingga 10% v/v. Umumnya digunakan untuk sel mamalia atau isolat mikroba yang lebih sensitif.
Formulasi Standar yang Direkomendasikan
Untuk membekukan kultur fluid, Anda bisa membuat larutan Media Preservasi dengan mencampurkan:
- Cairan Kultur Isolat (50%)
- Larutan Buffer (misalnya HEPES atau Potassium Phosphate 20–50 mM untuk menjaga pH)
- Gliserol Steril (hingga mencapai konsentrasi akhir sekitar 15–20% dalam total campuran)
Tips Tambahan: Pastikan proses pencampuran dilakukan secara aseptis dan homogen sebelum dimasukkan ke dalam cryovial dan disimpan langsung ke dalam deep freezer.